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抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)
ANA是最常出现于自身免疫性风湿病(结缔组织病)患者血清中的一组自身抗体的总称。其靶抗原为真核细胞核成分,但也包括某些细胞质和细胞骨架成分,无种属特异性和器官特异性。
IIF法:正常人血清中ANA阴性(不同试剂盒判定阳性的滴度不同,有的为>1:40,有的定为>1:80,有的定为>l:100)。
ELISA法:定性试验阴性;
定量试验< 40U/ml。
1.测定ANA对很多自身免疫性疾病有诊断价值,在不同疾病中,特别是风湿性疾病,其抗体谱有一定的特征性。重要的有:全身性红斑狼疮(SLE)、药物诱导的狼疮、混合性结缔组织病(MCTD),ANA检出率可达95%~100%;干燥综合症为70%~80%,进行性全身硬化症(PSS)检出率可达85%~95%,其他如类风湿性关节炎、多发性肌炎及皮肌炎、慢性活动性肝炎、溃疡性结肠炎等也有20%~50%的检出率。此外,桥本甲状腺炎、重症肌无力、多发性动脉炎等患者也可检出ANA。
2.用荧光抗体法检测ANA时不同荧光图谱可见以下几点:
(l)均质型:此型与抗组蛋白抗体、抗DNA抗体及抗核小体抗体引起,几乎所有活动性SLE患者均可检出此型抗体,但多种其他自身免疫性疾病此抗体的检出率也可达20%~30%。
(2)周边型:此型抗体所针对的靶抗原是膜孔复合物和板层素。针对前者的抗体多见于SLE患者,针对后者的抗体可见于慢性自身免疫性肝炎的活动期。
(3)斑点型:与此型相关抗体有抗U1nRNP、抗Sm、抗scI70、抗SS-B、抗SS-A、抗Ki、抗Ku及抗其他非组蛋白抗体,多见于混合型结缔组织病(MCDT,也可见于SLE和60%以上的进行性全身性硬化(PPS)患者。
(4)核仁型:此型与核糖体、U3 -RNP、RNA聚合酶的抗体有关,除SLE外,硬皮病患者阳性率可达40%。
(5)着丝粒型:抗着丝粒抗体对局限型全身性硬化症有很高的敏感性和特异性,阳性率可以达到80%~95%。
3.测定结果判断受主观因素影响较大,因此荧光染色图谱只有相对参考意义,不能据此作出定论,必要时应进一步作特异性ANA检测。
1.ELISA法影响因素较多,标本要防止溶血,因红细胞中含有过氧化物酶.红细胞裂解后造成标本溶血,过氧化物酶释放于血清中,与试剂中的辣根过氧化物酶作用相似,易造成假阳性。
2.要注意hook效应,即标本含量过高时,由于抗原一抗体比例不合适,易出现假阴性结果。
3.抗心律失常药物,如普鲁卡因胺、肼苯达嗪,异烟肼,苯妥英钠,保泰松等药物可引起假阳性。
4.洗涤次数要适当,防止洗涤不彻底致假阳性或洗涤过多致假阴性,要严格按照试剂盒说明书要求进行操作。
抗双链DNA抗体(anti-double stranded DNA antibody,an-ti-dsDNA)
抗DNA抗体可分为两种基本:抗双链DNA抗体或天然DNA和抗单链或变性DNA。
IIF法:正常人血清中抗dsDNA抗体滴度<1:10。
RIA法:正常人血清中抗dsDNA抗体结合率≤0.20(20%)。
1.抗ds-DNA自身抗体是SLE最重要的标志性自身抗体。
2.抗ds-DNA抗体对SLE特异性很高,尤其当检测试剂中所用的ds-DNA不含单链或变性片段且阳性滴度较高时,对SLE特异性可达85%。RA患者阳性率最多为1%;干燥综合征、MCTD阳性率在10%以内。
3.高滴度抗ds-DNA抗体提示SLE处于活动期。此抗体直接与肾小球细胞内DNA结合或与循环中的DNA结合形成免疫复合物沉积于肾小球基底膜,故与狼疮性肾炎密切相关、特别是当血清补体C3、C4水平降低。
待测血清最好于采集当日检测。
抗ENA抗体(antibodies to extractable nuclear antigen,ENA)
ENA为可提取性核抗原的简称,有三个组成部分:组蛋白、DNA、可溶性核抗原。现已发现有临床诊断价值的包括S(ss-B)、PM-1等10余种抗原,抗ENA抗体为其总称。
免疫印迹法:正常人血清中抗ENA抗体为阴性。
目前临床已将抗ENA抗体检测作为结缔组织病的重要诊断标准之一,蛋白质印迹法可同时检测数种多肽抗体,但与免疫电泳法比较其阳性率并无明显提高,因此ENA抗体阴性,不能排除某种风湿病的可能性。
1.抗Sm抗体主要见于SLE及其重叠综合征,有学者认为抗Sm抗体可作为SLE的标志性抗体,也有报告认为抗Sm抗体阳性的SLE患者,雷诺现象较多,可发生肾脏病变,预后不良,与其相反的观点是抗Sm抗体阳性与SLE活动期和肾脏损害无关,不能 作为判断SLE及临床活动、好转和疗效的依据。
2.抗RNP抗体见于多种风湿病患者,SLE患者的阳性率30%~50%;PSS25%~30%;皮肌炎10%~20%;RA5%一10%,该抗体滴度通常较低。在混合性结缔组织病(MCTD)患者,阳性率为lOO%。因此,高滴度的抗RNP抗体被认为MCTD的诊断标志。抗RNP,但混合性结缔组织病患者阳性率可达95%~100%,且效价很高。抗RNP抗体阳性与肌炎、食管运动功能障碍、雷诺现象相关,但阳性患者多不发生肾炎。
3.抗SS-A和抗SS-B抗体为干燥综合征的标志性抗体。
4.抗Scl-70为全身性硬皮病的标志性抗体。
5.抗Jo-l抗体被认为是肺病相关肌炎的标志性抗体。
6.抗Rib抗体主要见于SLE患者,阳性率为10%—40%,在其他疾病中很少出现,可视为SLE的另一标志性抗体
标本要新鲜,取血后及时检测;所用器皿要清洁,防止蛋白酶对ENA的破坏。
抗组蛋白抗体(antihistone antibodies,AHA)
组蛋白是核内最丰富的蛋白质,它与DNA结合组成染色质,无种属特异性和器官特异性,易与DNA、Ig及补体成分结合,正常人群常为阴性。
ELISA法:正常人血清抗组蛋白抗体为阴性。
1.抗组蛋白抗体多见于95%的药物性狼疮患者,也见于30%~70%SLE,15%~50%的RA患者。
2.在Felty's综合征患者中,抗组蛋白抗体检出率可达83%,RA相关的血管炎患者阳性率为75%,青年型类风湿性关节炎(JRA)患者阳性率为20%在非风湿性自身免疫疾病中,原发性胆汁 性肝硬化患者约有76%抗组蛋白抗体阳性。
3.组蛋白亚型较多,在做组蛋白总抗体检测时,最好同时检测抗H2A、H2B抗体,以排除药物性狼疮。
抗心磷脂抗体(anti-cardiolipin antibody,ACA)
抗磷脂抗体是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体,其中以ACA最为重要。ACA是以心磷脂为靶抗原的一种自身抗体,能干扰磷脂依赖性的凝血过程,抑制内皮细胞释放前列环素,与凝血系统改变、血栓形成、心脑血管缺血性疾病等密切相关。
ELISA:正常人血清中抗ACA抗体阴性。
1.ACA阳性主要见于各种自身免疫病(如SLE、类风湿性关节炎、干燥综合征、皮肌炎、硬皮病等)患者中。在肿瘤、AIDS、麻风、疟疾、血小板减少症、脑卒中、心肌梗死、反复自发性流产者、抗磷脂综合征(包括血栓形成、自发性流产、血小板减少、CNS病变等)
患者中也有较高的检出率,且高滴度的ACA可作为预测流产发生及血栓形成的较为敏感的指标。
2.从Ig的类型来看,风湿病以IgG型ACA为主;脑血栓患者以IgG型AcA阳性率最高,且与临床密切相关;约70%ACA阳性孕妇可发生自发性流产和宫内死胎,尤其是IgM型ACA阳性可作为自发性流产的前瞻性指标;ACA阳性患者血小板减少发生率明显高于阴性者,以IgG型ACA多见,... -->>
抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)
ANA是最常出现于自身免疫性风湿病(结缔组织病)患者血清中的一组自身抗体的总称。其靶抗原为真核细胞核成分,但也包括某些细胞质和细胞骨架成分,无种属特异性和器官特异性。
IIF法:正常人血清中ANA阴性(不同试剂盒判定阳性的滴度不同,有的为>1:40,有的定为>1:80,有的定为>l:100)。
ELISA法:定性试验阴性;
定量试验< 40U/ml。
1.测定ANA对很多自身免疫性疾病有诊断价值,在不同疾病中,特别是风湿性疾病,其抗体谱有一定的特征性。重要的有:全身性红斑狼疮(SLE)、药物诱导的狼疮、混合性结缔组织病(MCTD),ANA检出率可达95%~100%;干燥综合症为70%~80%,进行性全身硬化症(PSS)检出率可达85%~95%,其他如类风湿性关节炎、多发性肌炎及皮肌炎、慢性活动性肝炎、溃疡性结肠炎等也有20%~50%的检出率。此外,桥本甲状腺炎、重症肌无力、多发性动脉炎等患者也可检出ANA。
2.用荧光抗体法检测ANA时不同荧光图谱可见以下几点:
(l)均质型:此型与抗组蛋白抗体、抗DNA抗体及抗核小体抗体引起,几乎所有活动性SLE患者均可检出此型抗体,但多种其他自身免疫性疾病此抗体的检出率也可达20%~30%。
(2)周边型:此型抗体所针对的靶抗原是膜孔复合物和板层素。针对前者的抗体多见于SLE患者,针对后者的抗体可见于慢性自身免疫性肝炎的活动期。
(3)斑点型:与此型相关抗体有抗U1nRNP、抗Sm、抗scI70、抗SS-B、抗SS-A、抗Ki、抗Ku及抗其他非组蛋白抗体,多见于混合型结缔组织病(MCDT,也可见于SLE和60%以上的进行性全身性硬化(PPS)患者。
(4)核仁型:此型与核糖体、U3 -RNP、RNA聚合酶的抗体有关,除SLE外,硬皮病患者阳性率可达40%。
(5)着丝粒型:抗着丝粒抗体对局限型全身性硬化症有很高的敏感性和特异性,阳性率可以达到80%~95%。
3.测定结果判断受主观因素影响较大,因此荧光染色图谱只有相对参考意义,不能据此作出定论,必要时应进一步作特异性ANA检测。
1.ELISA法影响因素较多,标本要防止溶血,因红细胞中含有过氧化物酶.红细胞裂解后造成标本溶血,过氧化物酶释放于血清中,与试剂中的辣根过氧化物酶作用相似,易造成假阳性。
2.要注意hook效应,即标本含量过高时,由于抗原一抗体比例不合适,易出现假阴性结果。
3.抗心律失常药物,如普鲁卡因胺、肼苯达嗪,异烟肼,苯妥英钠,保泰松等药物可引起假阳性。
4.洗涤次数要适当,防止洗涤不彻底致假阳性或洗涤过多致假阴性,要严格按照试剂盒说明书要求进行操作。
抗双链DNA抗体(anti-double stranded DNA antibody,an-ti-dsDNA)
抗DNA抗体可分为两种基本:抗双链DNA抗体或天然DNA和抗单链或变性DNA。
IIF法:正常人血清中抗dsDNA抗体滴度<1:10。
RIA法:正常人血清中抗dsDNA抗体结合率≤0.20(20%)。
1.抗ds-DNA自身抗体是SLE最重要的标志性自身抗体。
2.抗ds-DNA抗体对SLE特异性很高,尤其当检测试剂中所用的ds-DNA不含单链或变性片段且阳性滴度较高时,对SLE特异性可达85%。RA患者阳性率最多为1%;干燥综合征、MCTD阳性率在10%以内。
3.高滴度抗ds-DNA抗体提示SLE处于活动期。此抗体直接与肾小球细胞内DNA结合或与循环中的DNA结合形成免疫复合物沉积于肾小球基底膜,故与狼疮性肾炎密切相关、特别是当血清补体C3、C4水平降低。
待测血清最好于采集当日检测。
抗ENA抗体(antibodies to extractable nuclear antigen,ENA)
ENA为可提取性核抗原的简称,有三个组成部分:组蛋白、DNA、可溶性核抗原。现已发现有临床诊断价值的包括S(ss-B)、PM-1等10余种抗原,抗ENA抗体为其总称。
免疫印迹法:正常人血清中抗ENA抗体为阴性。
目前临床已将抗ENA抗体检测作为结缔组织病的重要诊断标准之一,蛋白质印迹法可同时检测数种多肽抗体,但与免疫电泳法比较其阳性率并无明显提高,因此ENA抗体阴性,不能排除某种风湿病的可能性。
1.抗Sm抗体主要见于SLE及其重叠综合征,有学者认为抗Sm抗体可作为SLE的标志性抗体,也有报告认为抗Sm抗体阳性的SLE患者,雷诺现象较多,可发生肾脏病变,预后不良,与其相反的观点是抗Sm抗体阳性与SLE活动期和肾脏损害无关,不能 作为判断SLE及临床活动、好转和疗效的依据。
2.抗RNP抗体见于多种风湿病患者,SLE患者的阳性率30%~50%;PSS25%~30%;皮肌炎10%~20%;RA5%一10%,该抗体滴度通常较低。在混合性结缔组织病(MCTD)患者,阳性率为lOO%。因此,高滴度的抗RNP抗体被认为MCTD的诊断标志。抗RNP,但混合性结缔组织病患者阳性率可达95%~100%,且效价很高。抗RNP抗体阳性与肌炎、食管运动功能障碍、雷诺现象相关,但阳性患者多不发生肾炎。
3.抗SS-A和抗SS-B抗体为干燥综合征的标志性抗体。
4.抗Scl-70为全身性硬皮病的标志性抗体。
5.抗Jo-l抗体被认为是肺病相关肌炎的标志性抗体。
6.抗Rib抗体主要见于SLE患者,阳性率为10%—40%,在其他疾病中很少出现,可视为SLE的另一标志性抗体
标本要新鲜,取血后及时检测;所用器皿要清洁,防止蛋白酶对ENA的破坏。
抗组蛋白抗体(antihistone antibodies,AHA)
组蛋白是核内最丰富的蛋白质,它与DNA结合组成染色质,无种属特异性和器官特异性,易与DNA、Ig及补体成分结合,正常人群常为阴性。
ELISA法:正常人血清抗组蛋白抗体为阴性。
1.抗组蛋白抗体多见于95%的药物性狼疮患者,也见于30%~70%SLE,15%~50%的RA患者。
2.在Felty's综合征患者中,抗组蛋白抗体检出率可达83%,RA相关的血管炎患者阳性率为75%,青年型类风湿性关节炎(JRA)患者阳性率为20%在非风湿性自身免疫疾病中,原发性胆汁 性肝硬化患者约有76%抗组蛋白抗体阳性。
3.组蛋白亚型较多,在做组蛋白总抗体检测时,最好同时检测抗H2A、H2B抗体,以排除药物性狼疮。
抗心磷脂抗体(anti-cardiolipin antibody,ACA)
抗磷脂抗体是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体,其中以ACA最为重要。ACA是以心磷脂为靶抗原的一种自身抗体,能干扰磷脂依赖性的凝血过程,抑制内皮细胞释放前列环素,与凝血系统改变、血栓形成、心脑血管缺血性疾病等密切相关。
ELISA:正常人血清中抗ACA抗体阴性。
1.ACA阳性主要见于各种自身免疫病(如SLE、类风湿性关节炎、干燥综合征、皮肌炎、硬皮病等)患者中。在肿瘤、AIDS、麻风、疟疾、血小板减少症、脑卒中、心肌梗死、反复自发性流产者、抗磷脂综合征(包括血栓形成、自发性流产、血小板减少、CNS病变等)
患者中也有较高的检出率,且高滴度的ACA可作为预测流产发生及血栓形成的较为敏感的指标。
2.从Ig的类型来看,风湿病以IgG型ACA为主;脑血栓患者以IgG型AcA阳性率最高,且与临床密切相关;约70%ACA阳性孕妇可发生自发性流产和宫内死胎,尤其是IgM型ACA阳性可作为自发性流产的前瞻性指标;ACA阳性患者血小板减少发生率明显高于阴性者,以IgG型ACA多见,... -->>
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